2018年8月- 间充质和神经干细胞的体内动态示踪技术与临床转化研究

干细胞示踪的动物研究和临床转化

发布时间:2020-05-07发件人:消息来源:江苏省生物材料与器件重点实验室

国家重点研发计划项目“间充质和神经干细胞的体内动态示踪技术与临床转化研究”工作进展

中山大学  杨扬教授

D-氨基半乳糖诱导的非人灵长类动物急性肝功能衰竭模型的建立及改良

通过之前预实验的摸索,我们确立了无麻醉下外周静脉给药诱导急性肝功能衰竭猴模型的建立,并且得出初步结论符合本课题模型要求的药物剂量应在0.2g.kg~0.3g/kg之间。根据初期实验结论,我们进行了0.20g/kg,0.235g/kg,0.270g/kg,0.30g/kg组的实验分组。

实验结果表明,0.20g/kg组,0.235g/kg组仅出现一过性肝功能损害后,逐渐恢复。0.27g/kg组,0.30g/kg组均出现了急性肝功能衰竭,但存活时间均不足5天以上,本课题所需模型要求达到肝衰竭维持5-7d以上,因此我们得出结论      给药剂量在0.235g/kg~0.27g/kg范围之间组符合急性肝衰竭诊断且维持5d以上,可作为后期干细胞示踪的理想动物模型。

下一步后续实验将在0.23g/kg~0.27g/kg完成分组,建立更加符合课题要求的急性肝衰竭猴模型。

 

SPIONs标记的GMP级的huc-MSCs移植到急性脊髓损伤大鼠体内MRI呈像观察

通过之前的系统性安全和质量评估实验,我们确立了SPIONs标记的GMP级的huc-MSCs的最佳标记浓度、细胞代次和孵育时间。200 μg/mL纳米铁剂转染P5代huc-MSCs体内外进行MRI呈像。体外呈像试验方法:200 μg/mL  PLL@RC转染huc-MSCs后,计数,4% PFA固定,分成5*105、 1*105、5*104、 1*104和 5*103分别重悬于盛有1%琼脂糖的EP管中,7.0T MRI呈像T2*序列---回波时间TE:7.0 ms;重复时间TR : 544.0 ms;视场FOV:4.0 cm;层厚: 1 mm。初期我们发现有一定的存在问题:MRI检测的图像结果不能定量反应试管内或细胞内铁含量,而且并不是所有EP管内标记的细胞量与图像的信号强度关系一致。后不断调整成像序列以及增加实验重复量。

随后我们建立急性脊髓损伤的大鼠模型,在胸椎8-9段进行脊髓横断术,并将标记后的细胞移植到大鼠手术部位。体内成像方法和分组:PLL@RC组,200 μg/mL PLL@RC转染huc-MSCs  1*107的移植到大鼠脊髓损伤部位;细胞组, 1*107 huc-MSCs移植到大鼠脊髓损伤部位;对照组,大鼠脊髓损伤部位不处理。术后24h 7.0T MRI呈像。细胞移植到脊髓损伤部位MRI呈像,T2*序列---TR/TE =80.0/1.6 ms, 层厚= 1.0 mm, and 平均次数= 13。术后24h,的确看到瑞存标记的一团黑色细胞。

将MRI成像结果表明体内外均可成像到标记后的干细胞,证明了瑞存标记的huc-MSCs的MRI的可视化。

图示为标记的huc-MSCs移植到大鼠脊髓损伤横断部位24h 的MRI图片。左图红色箭头为细胞团块,右图为对照组