传统的免疫组化方法主要依靠操作者的主观判断，对操作者个人经验要求很高，因此临床上急需发展定量的免疫组化检测方法。3，3-二氨基联苯胺（DAB）氧化沉积物是传统免疫组化检测中常见的染色产物，我们在工作中首次发现该物质具有特殊的暗场散射成像性质。我们探究了DAB氧化产物pDAB的暗场散射机理，并在此基础上建立了一种新型的免疫组化检测方法，在HER2过表达的乳腺癌肿瘤切片的诊断中获得了成功，并建立了针对暗场散射强度的量化分级标准和相关的图像分析软件。为了获得更灵敏的诊断，我们使用辣根过氧化物酶（HRP）标记的二抗与金纳米颗粒构建探针，我们已通过实验证明，由于加载了更多HRP，该改良方法可以增强DAB氧化沉积从而获得更强的DAB氧化产物暗场标记信号。同时，由于金纳米颗粒本身具有类过氧化物酶作用和暗场散射效应，除作为载体外，还能起到协同增强的作用。
Fan L, Tian Y, Yin R, et al. Enzyme catalysis enhanced dark-field imaging as a novel immunohistochemical method[J]. Nanoscale, 2016.
http://pubs.rsc.org/en/content/articlepdf/2016/NR/C5NR08232C
图1. 暗场散射结果（100×）软件分析结果。四种不同阳性程度的乳腺癌组织切片经传统免疫组化DAB染色后进行暗场成像，暗场成像结果已通过图像分析软件提取出红色和黄色，并进一步计算处理。
图2. 相同阳性程度的乳腺癌组织切片和乳腺癌BT474细胞的暗场和相应的明场照片（100×）及软件分析结果。未经染色的乳腺癌组织切片（a）和乳腺癌BT474细胞（b）的暗场及相应的明场照片。传统免疫组化检测方法染色的乳腺癌组织切片（c）和乳腺癌BT474细胞（d）的暗场及相应的明场照片。新型系统增强免疫组化方法染色处理的乳腺癌组织切片（e）和乳腺癌BT474细胞（f）的暗场及相应的明场照片。（e）图局部放大（g）。
研究进展