金纳米探针同时基于暗场成像和DAB染色针对Raji细胞表面CD20过表达程度的检测

随着纳米科技的发展，金纳米颗粒在肿瘤抑制、光热疗法，以及肿瘤诊断等方面都表现出独特的优势。由于金纳米颗粒具有独特的光学和电学特性，以及良好的稳定性和表面效应，同时具有独特的尺寸依赖的生物相容性和较低的毒性。其中金纳米颗粒的暗场散射特性受到了较为广泛关注，此外，其模拟酶效应的特点也逐渐成为研究的热点，其不仅可以模拟过氧化物酶的催化特性，还可以避免天然酶的弊端。

本文将可以特异性识别恶性淋巴瘤细胞表面过表达的CD20分子的利妥昔单抗(Rituximab)与金纳米颗粒偶联，构建Rituximab-Au探针，并利用金纳米颗粒在散射作用和模拟酶效应，建立了一种新型的免疫组化检测方法。在明场显微镜下，特异性标记于细胞表面的金纳米探针可模拟过氧化物酶催化DAB显色，并通过显色程度反映细胞标志性分子的过表达程度，即肿瘤细胞的恶性程度。在暗场下，金纳米颗粒可以散射发光，通过量化细胞暗场照片的亮度亦可获得细胞标志性分子的过表达程度，从而获得肿瘤细胞的恶性程度。将明、暗场照片相结合，可实现在同一张图片中读取多种信息，同时两方面的信息又可以相互印证，从而在传统的荧光免疫杂交法与免疫酶法的基础上建立一种成本低廉、准确度高、可量化的肿瘤检测方法。

Fan Lin, Doudou Lou, Yu Zhang, Ning Gu, Rituximab–Au nanoprobes for simultaneous dark-field imaging and DAB staining of CD20 over-expressed on Raji cells, Analyst, 2014,139, 5661-5664.

Scheme 1 Rituximab-Au 纳米探针对CD20过表达的Raji细胞标记过程.

Fig 1 Rituximab-Au 纳米探针标记Raji细胞暗场照片,实验组(a),其他5个对照组(b-f).以上照片均由 Photoshop 8.0.1统一背景颜色.

Fig 2 Raji细胞表面经100(a), 50(b), 10(c) 倍级无(d)Rituximab封闭后,由Rituximab-Au 纳米探针标记的暗场照片.

Fig 3 (a) Rituximab-Au 纳米探针标记Raji细胞明场照片,纳米金用于模拟过氧化物酶催化DAB显色. (b) Rituximab-Au 纳米探针标记Raji细胞明场照片,未经DAB显色. (c, d) a &b图对应的暗场照片.